Der Mastermix für die realtime PCR enthält: EvaGreen, dUTP und UNG

qPCR Master mix E1: Datenblatt
qPCR Master mix E1: Englische Beschreibung

Features:
- der Mastermix für die Real-Time PCR enthält dUTP statt dTTP
- UNG zur Vermeidung von Kreuzkontaminationen liegt optimiert vor
- EvaGreen ist als interkalierender Farbstoff bereits enthalten
- der Mastermix E2 ist durch sein einzigartiges Puffersystem optimiert für Spezifität und Sensitivität
- er ist gebrauchsfertig gemischt und wird ready-to-use geliefert
- Der qPCR-Mastermix kann mit ROX als Referenz-Farbstoff (1x konzentriert) verwendet werden

Anwendung:
- Detektion und Quantifizierung von DNA und cDNA 
- Gen-Expression profiling
- "Viral load"-Bestimmung
- Real-time PCR mit Block-Cyclern
- Standard PCR
- Geeignet für die HRM Analyse

Kompatibel mit:
BioRad: iCycler, MyiQ, MiQ 2, iQ 5, CFX-96, CFX-384, MJ Opticon, Option2, Chromo4, MiniOpticon
Qiagen: Roto-Gene Q, Roto-Gene3000, Roto-Gene 6000
Eppendorf: Mastercycler realplex
Illumina: Eco RealTime PCR System
Cepheid: SmartCyler
Roche: LIghtCycler 480, LightCycler 2.0

Beschreibung:
Der Mastermix ist eine fertige Mischung aller Komponenten für eine erfolgreiche Realtime PCR. Nur Template-DNA und Primer werden zugegeben. Hohe Spezifität und Sensitivität werden durch eine hochaktive Hot-Start Polymerase und einen optimierten Puffersystem gewährleistet.    Herausragend ist die kurze Deaktivierungszeit der Polymerase beim ersten Denaturierungsschritt. Es werden unspezifische PCR-Produkte vermieden.
Anstatt dTTP wird dUTP verwendet, das bei der Behandlung mit UNG (Uracil-Glykosylase, bereits optimiert im Mastermix) Kreuzkontaminationen vorangegangener PCR-Ansätze verhindert.
Der interkalierende Farbstoff EvaGreen, das sehr stabil ist und keine inhibitorische Wirkung auf die PCR hat, liegt in einer optimalen Konzentration vor.

Konzentration: Der Mastermix ist 2-fach konzentriert

Kitbestandteile:
Hot-Start Polymerase für qPCR, dNTPs, EvaGreen, UNG, Reaktionspuffer mit KCl und MgCl₂, Stabilisatoren und Enhancer, "PCR-grade" Wasser

Transport: mit Kühlakkus

Lagerung: bei +4°C für 3 Monate; bei -20°C für mehr als 12 Monate. Das Produkt vor Licht schützen

Anwendung:

Komponenten	Volumen	Fin. Konz.
2X qPCR / RTD-PCR Master mix E1	25 µl	1x
Up-stream primer (10 µM stock)	1,5 µl (Bereich 0,5-2.5 µl)	300 nM
Down-stream primer (10µM stock)	1,5 µl (Bereich 0.5-2,5 µl	300 nM
Template DNA	5 µl  (0.1-15 ng/ml Plasmid DNA)  (1-10 µg/ml genomische DNA)	< 500ng DNA
Steril dest. Water (ist beinhaltet)	bis 50 µl

Hinweis:
- Alle Komponenten vor dem Ansatz vortexen/gut mischen
- Reaktionsgemisch auf Eis ansetzen
- Möglicherweise ist es erforderlich die MgCl₂-Konzentration zu optimieren

Standard Cyler-Protokoll:

Schritt	Zeit	Temperatur
UNG Behandlung	2 Min	50°C
Erste Denaturierung	1-3 Min	94-95°C
25-40 Zyklen:  Denaturierung  Annealing  Extension	Sekunden  10-25   10-25    60	94-95°C  45-70°C  68-72°C per 1kb
Schluss-Extension	30 / 500 bp	68-72°C

Hinweis:
Bei der Arbeit mit EvaGreen wählen Sie einfach die optischen Einstellung für FAM oder SybrGreen