Gefriergetrockneter PCR Mastermix für High-End PCR

Gefriergetrockneter PCR Mastermix: engl. Datasheet
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Gefriergetrockneter PCR Mastermix: Englische Beschreibung:


Features:
- Alle Komponenten wie Hot-Start Taq Polymerase, dNTP's, Reaktionspuffer, blauer "tracking"-Farbstoff und

  Enhancer sind gefriergetrocknet und stabilisiert
- Transport und kurzfristige Lagerung bei Raumtemperatur
- Extrem einfaches Handling vor, bei und nach der PCR für High-End Resultate
- direktes laden nach der PCR auf das Agarosegel

Beschreibung: 
DNA-Polymerase ist ein temperaturstabiles Enzym mit einem Molekulargewicht von ca. 94 kDa, aus dem Eubakterium Thermus aquaticus. Das unmodifizierte Enzym erreicht seine höchste Prozessivität  bei 72°C. Es katalysiert die Polymerisierung von Nukleotiden in Duplex-DNA in der 5' → 3'-Richtung in Anwesenheit von Magnesiumionen. Der gefriergetrocknete Mastermix ist "ready-to-use" und besteht aus Hot-StartTaq DNA Polymerase, dNTP's, optimierten Reaktionspuffer und Stabilisatoren und blauen Ladepuffer.

Komponenten:  
12x8  PCR-Tubes (0,2ml) "flat cap" mit gefriergetrocknetem PCR-Mastermix, PCR-diluent, PCR-oil

Einheitenbestimmung: 
Eine Unit ist die Enzymmenge, die benötigt wird, um 10 nmol dNTP in 30 min bei 74 °C in säureunlösliche Substanz zu überführen.

Qualitätskontrolle: 
- PCR Tests mit Lambda DNA (4kb), humaner Plazenta DNA 2,5 kb
- Abwesenheit von Endo- und Exonukleasen
- Kontrolle auf Chargenabweichungen und Verunreinigung mit DNA 

Lagerung/Transport: kurzfristige Lagerung und Transport bei RT, Sonst bei 4-8°C für längere Lagerzeiträume

Verwendung:  

Komponente	Volumen pro Reaktion
1 Tube  Maximo Dry Mastermix
PCR Diluent	10 µl
Up-stream primer (0.1-0.5 mM)	5 µl
Down-stream primer (0.1-0.5 mM)	5 µl
Template DNA	0.1-15 ng/ml Plasmid DNA  1-10 µg/ml genomische DNA  (2-10 µl)
Steril dest. Wasser (Molbio-Grade)	bis 25 µl Reaktionsvolumen

Note: 
- gründlich vortexen und zentrifugieren


 Allgemeines Protokol:

Step	Zeit	Temperatur
Initiale Denaturation	2-4 min	94-95°C
25-30 Zyklen:  Denaturierung  Annealing  Extension	10-25 sec  10-25 sec  60 sec	94-95°C  45-70°C  68-72°C per 1kb
Abschließende  Extension	5 min	68-72°C