Die verbesserte DFS Taq Polymerase: höhere Sensitivität und robuster gegenüber Inhibitoren durch neue Additive

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DFS-Plus Taq DNA Polymerase: Datenblatt
DFS-Plus Taq DNA Polyerase: English Description

Features:
Durch die Optimierung der bewährten DFS-Taq DNA Polymerase mit neuen Reaktionspuffer und speziellen Additiven entstand eine Polymerase, die nicht nur frei von bakterieller DNA ist, sondern auch sehr robust gegenüber PCR-Inhibitoren reagiert (Biomolekülen wie Polysacchariden, Fette und Proteine). Gesteigerte Performance des Enzyms sichert überlegene Sensitivität und zuverlässige Amplifikation. 

Beschreibung:
Die Polymerase repliziert DNA bei 72°C. Sie katalysiert die Polymerisation von Nukleotiden zu Doppelstrang-DNA in 5´-->3´ Richtung und besitzt 5´-->3´ Exonuklease-Aktivität.

Anwendungsbereich:
Anstelle von konventionell gereinigter Taq-DNA-Polymerase für sensitive PCR Untersuchungen, Nachweise von Bakterien-DNA oder wenn Biomoleküle die PCR inhibieren.

Konzentration:
5 units/μl gelöst in 10 mM KPO₄ (pH 7.4 bei 25 °C), 0.1 mM EDTA, 0.1%, Tween 20, 0.1 % Triton X-100 und 50 % (v/v) Glycerin.

Unitdefinition:
Ein Unit ist die Enzymmenge, die bei 74 °C in 30 min 10 nmol Desoxyribonukleotide in TCA-fällbares, säureunlösliches Material umwandelt

Qualitätskontrollen:
Endonukleasen:
- Eine Inkubation von 20 Units des Enzyms in 50 μl 1x Reaktionspuffer mit 1 μg Lambda
  DNA für 16 h bei 65 °C ergibt keinen nachweisbaren DNA-Abbau.
- Eine Inkubation von 20 Units des Enzyms in 50 μl 1x Reaktionspuffer mit 1 μg Lambda EcoR I/Hind III-
  Fragmenten für 16 h bei 65 °C führt zu keinem nachweisbaren Abbau der DNA.
- Eine Inkubation von 32 Units des Enzyms in 50 μl 1x Reaktionspuffer mit 1 μg supercoiled pUC18 DNA für 
  16 h bei 70 °C resultiert in keiner Entwindung der DNA.
Priming-Aktivität:
 - Eine Inkubation von 40 Units des Enzyms in 100 μl 1x Reaktionspuffer mit 100 ng Template-DNA und je
   0.2 mM dNTPs führt ohne Primer zu keiner DNA-Synthese.
PCR-Test:
-  Gute DNA-Amplifikationen wurden bei Verwendung von Lambda-DNA (amplifiziertes
    Fragment 12 kb) und humaner Plazenta-DNA (amplifiziertes Fragment 3.0 kb) als Templates erreicht.
DNA-Gehalt
- Frei von Kontaminationen mit enterobakterieller DNA.

Reaktionspuffer:
DFS-Plus Taq DNA Polymerase wird mit zwei Ammoniumsulfat Puffern und MgCl₂ (100mM) geliefert.
Lagerung:
Um das Wachstum von Bakterien zu verhindern, die während der Verwendung in die Lösungen eingebracht werden können, wird eine Lagerung bei –20 °C empfohlen.

Transport: Mit Kühlakkus

Komponenten	Volumen pro Reaktion
10X Reaktionspuffer	5 µl
100 mM MgCl2	optional
dNTP-Mix (40mM)	1.0 µl
Up-stream Primer (10 µM stock)	0,5-2.5 µl
Down-stream Primer (10µM stock)	0.5-2,5 µl
Template DNA	0.1-15 ng/ml Plasmid DNA  1-10 µg/ml genomische DNA
DFS-Plus Taq DNA Pol. (5 u/µl)	0.1 - 0.8 µl
Steriles dest. Water (PCR-Grade)	bis  50 µl Reaktionsvolumen

Hinweis: 
- Alle Komponenten vor dem Ansatz vortexen
- Reaktionsgemisch bei Raumtemperatur ansetzen
- Das Enzym nach der Template-DNA zusetzen
- Möglicherweise ist es erforderlich die MgCl₂ zu optimieren

Standard-PCR-Protokoll:

Schritt	Zeit	Temperatur
Erste Denaturierung	ca. 5 min	94-95°C
25-30 Zyklen:  Denaturierung  Annealing  Extension	10-25 sec  10-25 sec  60 sec	94-95°C  55-65°C  72°C pro 1kb
Schluss-Extension	5 min	72°C

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