AMV Reverse Transkriptase

AMV Reverse Transkriptase ist eine RNA-abhängige DNA Polymerase

Kat.-Nr:	Beschreibung	Menge	Preis €	Shop
105-400	AMV Reverse Transkriptase	200 units	45.00	add
105-410	AMV Reverse Transkriptase	5x200 units	170.00	add

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AMV Reverse Transkriptase: Datenblatt
AMV Reverse Transkriptase: English description

Anwendungen:
- Exprimiert als ein sehr stabiles Polymer mit hoher Aktivität
- robust in der cDNA Synthese und RT-PCR
- synthetisiert cDNA in einem breitem Temperaturspektrum
- für den Gebrauch in RT-PCR, cDNA Bibliotheken, RAMP, NASBA und Didesoxy-DNA Sequenzierung

Beschreibung:
AMV Reverase Transkriptase wird aus einer rekombinanten Quelle aufgereinigt und ist eine RNA-abhängige DNA Polymerase. Sie beginnt bei einem kurzen DNA-Fragment (Primer) und synthetisiert, von diesem Primer ausgehend, einen komplementären DNA-Strang. AMV-RT benutzt entweder RNA oder einzelsträngige DNA als Vorlage (Template). Es katalysiert die Polymerisation von DNA unter Verwendung von DNA, RNA oder RNA:DNA-Hybriden als Template. Das Enzym benötigt einen Primer (DNA-Primer sind effizienter als RNA-Primer) sowie Mg2⁺ oder Mn2⁺. Das Enzym besitzt eine RNase H-Aktivität

Konzentration: 10 u/µl

Lagerpuffer:
200mM Kaliumphosphat (pH 7.2), 0.2% Triton X-100, 2mM DTT und 50% Glyzerin

Reaktionspuffer 5X:
250mM Tris-HCl (pH8.3 bei 25°C), 250 mM KCl, 50mM MgCl2, 2.5mM Spermidin und 50mM DTT

Einheitendefinition:
Eine Einheit ist die Menge des Enzyms, das erforderlich ist, um 1 nmol dTTP in 10 Minuten bei 37°C in säureunlösliche Form zu überführen.

Qualitätstests:
- Erststrang cDNA Synthese
- Endonuklease und Nuklease Aktivitäts Tests

Anwendung:
Standard-Protokoll AMV.
Wir empfehlen 2 Mischungen anzusetzen

Mix I

Komponenten Menge/Konzentration

RNA
oder
polyA RNA 2 µg

50-500 ng

Primer 500 ng for each µg of RNA

steriles Wasser (PCR-Grade)

vortexen bis 8 µl (max. 11µl)

Inkubation Temperatur

5 Min 70 °C

5 Min auf Eis abkühlen

Mix II

Komponenten Menge/Konz.

AMV 5X Reaktionspuffer 5 µl

dNTP Mix (je 10 mM = 40 mM) 2.5 µl

optional: RNAsin 20-40 units

Natriumpyrophosphat (40 mM) @ 42°C 2,5 µl (

AMV Reverse (10 u/µl) 3 µl (30 units)

steriles Wasser (PCR-Grade) up to 25 µl

Mix I und Mix II ausreichend vortexen

richten eines Tubes mit 2–5 μCi [α^-32P]dCTP

5 µl vom Mastermix (Mix I und Mix II) in diese
Tube transferieren (Mix III)

Inkubieren
60 Min für Oligo(dT) Primer
oder
60 Min für Randomhexamer Primer
42°C

37°C

Nach der Inkubation:
Mastermix auf Eis bringen

95 µl von 50 mM EDTA zu Mix III pipettieren
(für die Gel-Analyse verwenden)

Für die "Zweitstrang" Synthese kann der
verbleibende Mix der Erstrang Synthese
verwendet werden

Transport: mit Kühlakkus

Lagerung: bei -20°C für 24 Monate

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